郭忠 廖禹東 贛南衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院 江西贛州 341000

　　作者簡介 : 郭忠 (1963.12),男,江西安遠,副教授,碩士。研究方向:化學(xué)分析研究及職業(yè)教育研究。

　　基金項目:江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目 課題編號181577

　　摘 要:燕窩一直是國人眼中的傳統(tǒng)滋補圣品,其重要的生物活化因子是被譽為“美容基因”的EGF,具有高效的抗氧 化作用。為了區(qū)分官燕與金絲燕窩EGF含量及體外抗氧化的不同,給燕窩的品質(zhì)分類及消費者對燕窩選擇提供科學(xué)依 據(jù),研究利用分光光度法測定燕窩中EGF含量,根據(jù)利用紫外可見分光光度計測得的樣品吸光度,計算樣品中EGF含 量。而EGF體外抗氧化實驗則利用FRAP(鐵離子還原能力)法,根據(jù)樣品將Fe3+-三吡啶三吖嗪還原成深藍色的 Fe2+-三吡 啶三吖嗪, 并在470nm處通過比色測出的樣品吸光度,比較EGF抗氧化活性的強弱。結(jié)果顯示,金絲燕的活性物質(zhì)EGF含 量與抗氧化能力均高于官燕。

　　關(guān)鍵詞:燕窩;EGF含量;抗氧化;實驗;研究

　　燕窩一直被人們視為上等滋補圣品。因燕窩當中含有對人 體有益的一系列健康成分,其中含有一種被譽為“美容基因”的 重要生物活性因子 EGF。對燕窩中的 EGF 含量進行分析,以 及進行抗氧化能力的研究,不僅有利于根據(jù)燕窩的品質(zhì)進行分 類,規(guī)范管理燕窩市場,減少市場的混亂現(xiàn)象,還可以比較不 同品種燕窩之間的差異,充分利用燕窩的抗氧化能力。[1]

　　本文選擇了 2 個價位不同種類的燕窩(分別為官燕,金絲 燕),生產(chǎn)年份一致,品牌加工方法一致,對其含有的活性成分 EGF 進行分析,并進行體外抗氧化實驗觀察,探討官燕、金絲燕 兩種燕窩中的活性物質(zhì) EGF 的含量及其抗氧化能力的異同。

　　1. 材料

　　1.1 儀器

　　托普樂公司生產(chǎn)的 hb-4 恒溫振蕩。上海越重儀器生產(chǎn)公 司生產(chǎn)的 cf-501 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器。日本富士生產(chǎn)的 uv1000 紫外 可見分光光度計。

　　1.2 藥品與試劑

　　碳酸鈉、蘆丁、三氯化鐵、鐵氰化鉀、以及甲醇均為分析純。生 產(chǎn)商:華西生物實驗有限公司。TPTZ(Fe3+- 三吡啶三吖嗪)、二 甲基亞砜為分析純,生產(chǎn)商:南京建成生物工程研究所。

　　1.3 樣品

　　官燕、金絲燕,均來源于印尼巴沙某燕窩產(chǎn)業(yè)園

　　2. 方法

　　2.1 樣品的處理

　　將 450g 的燕窩樣品放置在 1000ml 純凈水當中進行發(fā)泡,發(fā)泡器皿要求無油無水,并在零上 5°C -15°C的溫度范圍之內(nèi),對燕窩的泡發(fā)溫度進行控制,精確到小數(shù)點四位。

　　2.2 EGF 的提取法

　　用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器對于燕窩中的有效 EGF 活性物質(zhì)進行提 取。之后將含有 EGF 活性物質(zhì)的提取樣品放置在 50ml 的提取試管當中,按照 1:20 的比例加入 40% 的無水乙醇,置于高速離心機中進行離心,轉(zhuǎn)速為每分鐘 4000 轉(zhuǎn),經(jīng)離心之后,放置 3min。等待樣品分層之后,在70°C的環(huán)境之下,對EGF活性物質(zhì)進行水浴,水浴 15min 之后,應(yīng)用過濾容器進行上層物質(zhì)的抽取,再將抽取到的 50ml 樣品放置在 100ml 的容量瓶中,待含量測定用。[2]

　　2.3 EGF 含量測定

　　2.3.1 標準儲備液的準備

　　用移液管從 2.2 步驟中的 100ml 容量瓶抽取 25ml 待測樣品,置于 1000ml 的檢測瓶中,用蒸餾水稀釋,獲得濃度為0.045% 毫克每毫升的標準儲備液,放置在 25°C的保存環(huán)境中進行儲存,24h 之后提取檢測。

　　2.3.2 EGF 含量測定法

　　采用分光光度法進行兩種燕窩中的 EGF 含量分析。具體操作如下:(1)分別準確吸取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml 的標準 EGF 活性物質(zhì)溶液,放置在 25ml 的棕色容量瓶當中,加入福林酚試劑 1.0ml,靜置 5min 之后搖勻,并加入 10% 濃度碳酸氫鈉溶液待充分溶解之后,放置在 25°C的封閉環(huán)境中進行保存。(2)從(1)中 5 種提取液分別吸取 0.1ml,置于 5 個 50ml 容量瓶中,分別加入 10ml 的蒸餾水,充分搖勻后放置在 25°C避光環(huán)境中,靜置 30min,讓其進行充分的化合反應(yīng)。之 后用紫外可見分光光度計進行含量分析。波長調(diào)至 470nm,每一樣品進行平行 5 次實驗測定吸光度,進行其含量計算。[3]

　　2.4 體外抗氧化能力的實驗利用 FRAP( 鐵離子還原能力 ) 法進行 EGF 體外抗氧化能 力的研究。原理為具有還原能力的抗氧化物質(zhì)將 Fe3+- 三吡啶 三吖嗪還原成深藍色的 Fe2+- 三吡啶三吖嗪 , 并于 517nm 處具有最大吸收光,通過比色測出的樣品吸光度比較抗氧化活性的強弱。以二甲基亞砜 (DMSO) 為溶劑 , 比較相同濃度 (100mg%) 體外總抗氧化活性。以 37 °C時每 min 每 100mg 樣品使反應(yīng)體系的吸光度 A 值每增加 0 .01 為一個抗氧化能力單位 (U/ mmol), 具體步驟按試劑盒 ( 南京建成生物工程研究)進行。[4]3 結(jié)果與分析

　　3.1 相同燕窩 EGF 活性物質(zhì)含量與吸光值的比較與結(jié)論

　　根據(jù) A=KCL 計算公式,由實驗測得的吸光度 A,計算樣品中 EGF 的含量 c, 本文從實驗數(shù)據(jù)及計算結(jié)果。按 2.3.2 中所述實驗測得的吸光度計算的 EGF 的含量見表 3-1。

　　從表 3 中可以 -1 可以看出,將濃度皆為 0.045% 毫克每毫升的官燕與金絲燕標準儲備液,分別稀釋 5000 倍、2500 倍、1250 倍、830 倍及 625 倍,將波長調(diào) 470nm,分別進行其吸光度 A, 從 測得的吸光度 A 分別計算溶液中的 EGF 活性物質(zhì)含量,從表 3-1 中顯而易見金絲燕中的 EGF 活性物質(zhì)含量>官燕當?shù)?EGF 活性物質(zhì)含量,即相同濃度的官燕與金絲燕溶液中 EGF 活性物質(zhì)含量差別比較大。[5]

　　3.2 官燕與金絲燕中 EGF 活性物質(zhì)抗氧化能力測定與比較

　　采用 FRAP( 鐵離子還原能力 ) 法,以二甲基亞砜 (DMSO) 為溶劑, 比較相同濃度條件下(100mg%),官燕與金絲燕中的 EGF 活性物質(zhì)體外總抗氧化活性,結(jié)果如下:

　　從表 3-2 可知,以二甲基亞砜 (DMSO) 為溶劑 , 相同濃度條件下。金絲燕的體外總抗氧化力顯著高于官燕。

　　結(jié)語

　　綜上所述,不同種類的燕窩在 EGF 活性物質(zhì)含量和抗氧化能力方面都具有較大差異,從目前獲得到的兩種樣品(官燕與金 絲燕)來看,相同質(zhì)量的不同種類燕窩,金絲燕燕窩的 EGF 活性物質(zhì)含量,明顯高于官燕中的 EGF 活性物質(zhì)含量,且體外總 抗氧化力也顯著高于官燕。本文的研究分析結(jié)果表明:金絲燕燕 窩中 EGF 活性物質(zhì)的含量以及體外抗氧化活性都高于官燕。此結(jié)論既有利于我們更好地區(qū)分燕窩之間的品質(zhì)差異,從而規(guī)范消費市場,又可為消費者提供正確認識與選擇燕窩的科學(xué)依據(jù)。

　　參考文獻

　　[1]柳訓(xùn)才,張小江,張曉婷.固相微萃取/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定燕窩 中揮發(fā)性成分[J].分析測試學(xué)報,2020,39(02):205-211.

　　[2]查圣華,王俊亮,廉翠翠.透明質(zhì)酸膠原蛋白冰糖燕窩研制及其改善皮膚 水分功效[J].食品工業(yè),2020,41(02):129-134.

　　[3]劉敬,鄧仙梅,趙斌.近五年燕窩質(zhì)量標準和藥理功效研究進展[J].亞太傳 統(tǒng)醫(yī)藥,2020,16(01):190-196.

　　[4]梅秀明,吳肖肖,喬玲.燕窩的營養(yǎng)成分和危害因子分析[J].現(xiàn)代食品科 技,2020,36(02):277-282+178.

　　[5]伍曉燕. 基于HPLC的燕窩與食品中唾液酸的含量測定及比較[D].上海 交通大學(xué),2019.