摘要：為了建立高效液相色譜與電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定茶葉中鉛鉻綠含量的分析方法，研究通過(guò)對(duì)樣品前處理的分析，確定樣品采用高溫灼燒，堿性提取液高溫水浴震蕩提取鉻酸根離子，液相色譜分離后，電感耦合等離子體質(zhì)譜儀進(jìn)行含量分析。研究發(fā)現(xiàn)在5-100μg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R=0.9999，鉛鉻綠的方法檢出限為1mg/kg，加標(biāo)回收率在71%-84%之間，精密度RSD＜2%。研究認(rèn)為，該方法回收率在合理范圍內(nèi)，檢出限低，精密度好，適合茶葉中鉛鉻綠含量的定量檢測(cè)。

　　鉛鉻綠又名美術(shù)綠，是用鉻酸鉛顏料沉淀到鐵藍(lán)顏料分散體上或使用鉻酸鉛顏料與鐵藍(lán)顏料混合均能制備出的一種顏料，主要用于涂料、油墨和搪瓷的著色等。［1］由于其顏色鮮艷，價(jià)格低廉，在茶葉中特別是綠茶中添加此種顏料可以使茶葉的顏色變綠，提高茶葉的色澤度從而被不法商販用于茶葉中改善茶葉的色澤，增加賣(mài)相，以次充好。［2］一種添加了工業(yè)色素“鉛鉻綠”的假碧螺春，其重金屬鉛含量超標(biāo)60倍（GB 2762-2017食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量［3］規(guī)定每公斤茶葉里面鉛的含量不能超過(guò)5毫克），由于添加了鉛鉻綠的茶葉重金屬超標(biāo)嚴(yán)重，飲用后會(huì)攝入大量人體不能降解的鉛和鉻，長(zhǎng)期飲用會(huì)對(duì)人體肝腎器官造成極大的傷害，［4］鑒于此，鉛鉻綠已經(jīng)被全國(guó)食品安全整頓工作辦列入食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單中。

　　通過(guò)資料文獻(xiàn)對(duì)鉛鉻綠的定義可知，鉻酸鉛和鐵藍(lán)是組成鉛鉻綠的主要成分，且無(wú)論何種色調(diào)及組成，均含有鉻酸鉛成分，且鉻酸鉛的比例大于50%，因此，可通過(guò)測(cè)定茶葉中鉛和鉻酸根（CrO42-）含量來(lái)確定茶葉中鉻酸鉛的量，進(jìn)而確定茶葉中是否含有鉛鉻綠存在。［1］其中鉛含量可以通過(guò)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定（GB 5009.12-2017）［5］進(jìn)行測(cè)定，鉻酸根（CrO42-）含量則可采用本方法中液相色譜與電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行定量，其具有線性范圍寬，檢出限低，重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可為有效監(jiān)測(cè)茶葉中的質(zhì)量提供技術(shù)支持。

　　1 材料與方法

　　1.1 主要儀器和試劑

　　儀器：U3000液相色譜儀（美國(guó)賽默飛公司）；電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（iCAP RQ，美國(guó)賽默飛公司）；電子天平（SECURA224-1CN，德國(guó)賽多利斯）；水浴恒溫磁力攪拌器（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；pH計(jì)（美國(guó)賽默飛公司）；可調(diào)式電阻爐（最大功率2000W）。

　　試劑：鉻酸鉛（CAS號(hào)：7758-97-6，純度≥99%）；硝酸（色譜純，美國(guó)賽默飛）；氨水、氫氧化鈉、碳酸鈉（優(yōu)級(jí)純，廣州化學(xué)試劑廠）；質(zhì)譜調(diào)諧液：Ba、Bi、Ce、Co、In、Li、U（1μg/L，美國(guó)賽默飛公司）。

　　試驗(yàn)樣品為市售綠茶（樣品粉碎過(guò) 200 目篩，儲(chǔ)存于密封袋中備用）。

　　1.2 溶液的配制

　　樣品堿性提取液：稱(chēng)取4.0g氫氧化鈉和6.0g碳酸鈉溶解并定容至1L，配制成0.1mol/LNaOH和0.056mol/LNa2CO3的混合溶液，并確保使用時(shí)pH值大于11.5。

　　標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0279g鉻酸鉛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100mL燒杯中，加入50mL堿性提取液，置于恒溫磁力攪拌水浴鍋中，在90℃-95℃溫度下不間斷攪拌30min，取出后冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水沖洗燒杯并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用水定容至刻度。溶液中CrO42-的濃度為100mg/L。

　　1.3 實(shí)驗(yàn)方法

　　1.3.1 液相色譜條件

　　色譜柱：G3268-80001 色譜柱（30mm×4.6mm，美國(guó)安捷倫公司）；流動(dòng)相（50mmol/L硝酸銨溶液）：移取3.4mL硝酸和3.7mL氨水用超純水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH值在7.0-7.2；流速：0.8mL/min；進(jìn)樣量：50μL。

　　1.3.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

　　用1μg/L質(zhì)譜調(diào)諧液對(duì)儀器條件進(jìn)行調(diào)諧，使儀器的靈敏度、雙電荷、氧化物、背景等各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，經(jīng)優(yōu)化后的儀器參數(shù)如表1所示。

表1質(zhì)譜參數(shù)條件

　　在優(yōu)化好的條件下，采用KED模式消除質(zhì)譜干擾，選擇52質(zhì)量數(shù)對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)試。

　　1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及曲線制定

　　取1.00mLCrO42-標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用流動(dòng)相（50mmol/L硝酸銨溶液）定容至10mL，得到濃度為10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液。再分別吸取0.05，0.1，0.2，0.5，1.0mL標(biāo)準(zhǔn)中間液于100mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容并混勻，得到濃度分別為5μg/L，10μg/L，20μg/L，50μg/L，100μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作液，上機(jī)測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度作曲線，見(jiàn)圖1，該標(biāo)準(zhǔn)系列線性方程為Y=44763.2314x+480.2876，線性相關(guān)系數(shù)r=0.9999。

圖1 鉻酸根標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　1.3.4 樣液的制備

　　準(zhǔn)確稱(chēng)取制備好的茶葉樣品1g（精確到0.01g）于100mL坩堝中，于2000W電爐上灼燒至無(wú)煙冒出，呈灰白的灰分狀態(tài)，關(guān)掉電爐，冷卻至室溫后加入50mL堿性提取液，置于磁力攪拌恒溫水浴鍋中，在90℃-95℃溫度下不間斷攪拌30min，取出后冷卻至室溫，定容至100mL容量瓶中，從中取1.0mL用流動(dòng)相定容至50mL，過(guò)0.45μm水系微孔濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)定。按同一操作方法進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)和空白試驗(yàn)。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化選擇

　　參考文獻(xiàn)方法，嘗試采用堿性提取液直接提取粉碎茶葉樣品中鉛鉻綠（已經(jīng)對(duì)該茶葉樣品進(jìn)行加標(biāo)），但檢測(cè)結(jié)果為未檢出。

圖2 不經(jīng)過(guò)茶葉樣品進(jìn)行萃取的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（10μg/L）

圖3 加標(biāo)茶葉樣品（50mg/kg）直接用堿性提取液提取之后測(cè)得的色譜圖

　　從上面的兩張圖中可以看出，加標(biāo)樣品在不經(jīng)過(guò)灰化堿性提取液直接提取后，鉻酸根含量大大降低，直接測(cè)算結(jié)果為低于方法的檢出限。原因可能為堿性提取液雖然對(duì)鉻酸鉛的提取能力很強(qiáng)，但是因?yàn)樵诓枞~中含有大量的氨茶堿、茶多酚等還原性物質(zhì)，在直接提取過(guò)程中，同時(shí)也將茶葉中這些物質(zhì)提取出來(lái)與鉻酸根中的六價(jià)鉻發(fā)生還原反應(yīng)生成三價(jià)鉻，而三價(jià)鉻屬于陽(yáng)離子而無(wú)法在陰離子柱中進(jìn)行分離而體現(xiàn)出來(lái)。故本實(shí)驗(yàn)采用堿性提取液對(duì)灰化后的茶葉樣品進(jìn)行萃取后進(jìn)行測(cè)定。樣品的全過(guò)程加標(biāo)回收見(jiàn)表2。

　　2.2 方法檢出限

　　方法檢出限參照色譜檢測(cè)中以3倍信噪比的儀器響應(yīng)值所對(duì)應(yīng)的濃度進(jìn)行計(jì)算，將空白茶葉基質(zhì)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋進(jìn)樣，確定0.2μg/L時(shí)所產(chǎn)生的信號(hào)值/噪音信號(hào)值≥3，故方法檢出限可定為0.2μg/L，按照樣品前處理方法，當(dāng)稱(chēng)樣量1g，定容體積為100mL，稀釋50倍時(shí)，鉻酸根的檢出限為1mg/kg。

圖4 茶葉基質(zhì)加標(biāo)樣品的 CrO42- 色譜圖（0.2μg/L）

　　2.3 回收率和精密度

　　為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，對(duì)茶葉樣品進(jìn)行高、中、低三水平加標(biāo)試驗(yàn)，按樣品的制備方法對(duì)加標(biāo)茶葉樣品進(jìn)行高溫灰化后，用堿性提取液在95℃水浴下不斷攪拌提取30min，同時(shí)對(duì)每個(gè)加標(biāo)提取液進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)試，以評(píng)價(jià)其精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率和精密度

　　3 結(jié)論

　　本試驗(yàn)建立了高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定茶葉中鉛鉻綠含量的分析方法，對(duì)前處理過(guò)程和實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)干擾進(jìn)行了消除和校正。并進(jìn)行了準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)，均在合理范圍內(nèi)。該方法前處理簡(jiǎn)單，干擾少，檢出限低、重復(fù)性好，在實(shí)際檢測(cè)工作中具有重要的意義。（精益和泰質(zhì)量檢測(cè)股份有限公司/肖亦群 花振新 黃姍姍）

參考文獻(xiàn)：

［1］王瑩、石金娥、楊波等。液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測(cè)茶葉中“美術(shù)綠”的含量［J］。食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2019，10（6）：1458-1464。

［2］陳利燕、魯成銀、劉歡。茶葉中鉛鉻綠的檢測(cè)方法研究［J］.熱帶農(nóng)業(yè)工程，2008,32（1）：38-44。

［3］GB 2762-2017。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量［S］.2017。

［4］石金娥、華蕾、李瀅倩等。離子色譜法和分光光度法測(cè)定茶葉中的鉛鉻綠含量［J］。食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2019，10（6）：1534-1540。

［5］GB 5009.12-2017。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定［S］.2017。